肉的宰后嫩化常见归因于肌原化学钎维框架的伤害，肌原化学钎维框架是由内源性球蛋清质电离酶溶解肌原化学钎维和肿瘤体受损神经血细胞骨架球蛋清质引致的。与十多年来持续是加关注聚焦点的钙球蛋清质酶与众不同，胱天球蛋清质酶（caspases）之前当上感好感时题。胱天球蛋清质酶在肿瘤体受损神经血细胞凋亡的继续执行第一阶段起着至关关键性的效率，在这当中caspase-3在死了球蛋清质电离中的效率是各几个方面和多样化的，故此划得来进十步调查。S-亚硝基化实现不错调试器钙尽情释放、电能消化吸收、球蛋清质质溶解和肿瘤体受损神经血细胞凋亡来不错调试器肉嫩，涵盖嫩度和持水效率。企业早期调查遇到S-亚硝基化不错上涨依赖性线粒体的caspase-3级联现象，这可能会是背部肌肉肿瘤体受损神经血细胞凋亡和牛羊肉品级变的的原因。caspase-3的调查重心是其与肿瘤体受损神经血细胞凋亡的关联，当然，少许有调查刍议S-亚硝基化不错调试器caspase-3的原则。

2024年9月由长沙水产业学校张万刚客座教授团对在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱生物制品为该研究提供了亚硝基化表达组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

繁体中文子标题：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

期刊杂志：Journal of Agricultural and Food Chemistry

202四年影响到指数公式：5.7

展现准确时间：2024年9月

客人组织：南京农业大学

深入分析素材：蛋白

拜谱提供数据工艺：亚硝基化修饰组学

技術自驾路线：

一、探析结局

01.Caspase-3活性酶

现下尚不非常清楚NO对caspase-3的克建设用是不是也归因于NO介导的S-亚硝基化，不同于有机废气浓度系数的GSNO用作外源性NO批发商，以诱导性caspase-3的离体S-亚硝基化。但是呈现，与沒有GSNO的组差距，100、200和400μM GSNO组的caspase-3可溶性更为明显大大减少（图1），与仍然简报共同。GSNO治理大大减少caspase-3可溶性的意向的原因仍进一步相一致。

图1 不同的氧化还原电位的GSNO净化处理对caspase-3几丁质酶的干扰

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化层度

研究Caspase-3的亚硝基化能力，以具体分析GSNO对Caspase-3的作用性。经GSNO清理后，判断到caspase-3淀粉酶S-亚硝基化标准添加（图2）。那些结论表面，外源性GSNO训练可取得胜利诱发caspase-3的离体S-亚硝基化。最令 震惊的是，在不GSNO发现的相较比较组中判断到一名不大的S-亚硝基化带，这表面caspase-3会发现内源性的S-亚硝基化。最后，本研究中caspase-3的S-亚硝基化能力较高，而caspase-3的活性酶类影响，这与刚刚的研究一直。既使，caspase-3的特喜欢的人S-亚硝基化掩盖位点尚不看不清楚，还应该进每一步的研究。

图2 GSNO加工处理对caspase-3S-亚硝基化质量的关系

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化掩盖组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的回文编码序列。蓝绿色标出的回文编码序列显示S-亚硝基化肽，蓝色标出的C显示S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱图

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3挥发结蛋清

结核核球核淀粉酶质是 1种根本的細胞骨架核核球核淀粉酶质，在恢复肌細胞框架的框架完成性和内缩性工作方面起着根本性能，论述S-亚硝基化caspase-3对结核核球核淀粉酶质可生物降解的刺激性性具备有根本效果。与Std（未用胱天核核球核淀粉酶质酶-3和GSNO孵育的初期肌化学化学纤维核核球核淀粉酶质）组相对比，0 μM GSNO组（肌原化学化学纤维和caspase-3的孵育，无GSNO）的完成结核核球核淀粉酶质含水量有显然大幅度降低，信息提示caspase-3对结核核球核淀粉酶质具备有不确定性的核核球核淀粉酶质电离性能。在GSNO孵育后，完成结核核球核淀粉酶质的含水量显然曾加（P < 0.05）。前者，当GSNO分子量身高时，完成结核核球核淀粉酶质的含水量维持上涨（P < 0.05）（图5）。这看到体现了，SNO遮盖的caspase-3以横向依赖于的方案抑制作用结核核球核淀粉酶质的可生物降解。

图5.S-亚硝基化caspase-3挥发结血清

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3溶解肌钙蛋白酶-T

肌钙球淀粉酶-T (TnT)是原肌球球淀粉酶调试管理肌肉组织缩水的细细的的必要肌原植物钎维素球淀粉酶。TnT的生物光光生物降解塑料特性是判断到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化条件下，caspase-3对TnT的生物光光生物降解塑料情况下如同6如下，与Std组（不包括caspase-3和GSNO的肌原植物钎维素）优于，caspase-3组中30 kDa TnT情节有效添加，得出结论caspase-3参与性了TnT的生物光光生物降解塑料，虽然，caspase-3与GSNO的孵育损害30 kDa TnT急剧下降。在100和200 μM GSNO组直接沒有判断到强烈的不一致性(P > 0.05)，而当GSNO的盐浓度满足400 μM 时，该情节有效下降(P < 0.05)。这部分发现得出结论了SNO掩盖的caspase-3对TnT生物光光生物降解塑料的遏开发用。结球淀粉酶和TnT是caspase-3的过敏底物，而GSNO加工处理拉低caspase-3的催化催化活性可能会损害肌原植物钎维素球淀粉酶生物光光生物降解塑料因素拉低。上面所诉，NO促进的S-亚硝基化也可以实现掩盖半胱氨酸残基来调试caspase-3的催化催化活性，以致更深层次的骤损害其对结球淀粉酶和TnT的球淀粉酶电离作用，而使损害羊肉品质质量。

图6. S-亚硝基化caspase- 3化学降解肌钙蛋清-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、个人心得体会

本研究方案目的在于讨论S-亚硝基化对caspase-3掩盖的直接决定和马上又对鸡肉肌原玻纤素离体挥发的直接决定。核蛋白质酶S-亚硝基化应该掩盖caspase-3的半胱氨酸残基，最后导至caspase-3化学活化减轻，进三步调控了其对鸡肉肌原玻纤素核蛋白质酶的核蛋白质酶淀粉水解特性。

三、拜谱总结ppt

探究用了酶活测定法，亚硝基化遮盖组学深入分析，WB等检查测量具体方法，看见球蛋白酶酶S-亚硝基化还可以遮盖caspase-3的半胱氨酸残基，这会导致了caspase-3灵活性的大大减少，并举一部阻止了其对鸡肉肌原植物纤维球蛋白酶酶的球蛋白酶酶水解反应技能。本探究为释义球蛋白酶酶质亚硝基化对口感的调空措施作为一个新的视距。

拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司，可提供完善成熟的球淀粉酶组学、掩盖球淀粉酶组学、新陈代谢组学、转录组学等多组学产品技术服务体系，整合多组学数据进行深入挖掘分析，全面解析机制机理等，助力高分文章发表。除此之外，拜谱生物还可提供半胱氨酸类型商品，包括亚硝基化、谷胱甘肽化、硫巯基化、次磺碱化、total脱色重置、存在巯基，欢迎大家咨询！

关联性医学文献：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663